Mladi Peter Parker (Tobey Maguire) skuša uskladiti študij na fakulteti s svojo službo fotografa, hkrati pa ohranja svoje skrivno življenje Spider-Mana, zakrinkanega borca proti zločinu.

Peter se trudi obdržati razmerje z Mary Jane (Kirsten Dunst), ki je začela žeti prve uspehe kot manekenka in igralka. Tako Mary Jane kot sam Peter sta opazila, da je začel on popuščati pod obremenitvijo.

Parkerjevo prijateljstvo s Harryjem Osbornom se prav tako krha zaradi Petrovega navideznega zavezništva s Spider-Manom, ki ga Harry krivi za smrt svojega očeta.

Medtem ko se Peter Parker sprašuje, ali bi opustil superjunaško življenje, se Spider-Man sooči z novim sovražnikom – blaznim znanstvenikom dr. Ottom Octaviusom, čigar zadnji projekt ga je spremenil v nepremagljivega kiborga Octopusa.